人类肌红蛋白nMb稳定性改良
发布日期：2024-12-19
发布者： 合肥意昂
ProteinMPNN能够在保证蛋白质构想不变的情况下，准确重塑天然蛋白，提高溶解性、热稳定性和功能稳定性。 人类肌红蛋白nMb稳定性改良流程： 1.研究团队使用人类肌红蛋白nMb的晶体结构进行设计和改造； 2.首先固定血红素结合结构中血红素配体周围的17个氨基酸位置，挑选了保守性差的loop区; 3.使用ProteinMPNN进行序列设计，改造重塑整个蛋白； 4.通过金属离子亲和层析（IMAC）和分子排阻色谱（SEC）,证明大部分变体的总可溶性蛋白产量变高4.1倍； 5.色谱测试表明：这些高表达变体，在结构上与天然肌红蛋白一致，并表现出更高的热稳定性； 6.以dnMb19为例，该变体在95℃下依然仍能保持完全折叠，而天然肌红蛋白在80℃时就会去折叠； 7..与天然肌红蛋白相比，dnMb19变体与血红素结合的热稳定性显著提高； 8.研究者进一步确定dnMb19晶体结构，发现与设计模型吻合度高；